免疫荧光技术在食品检测中的应用(2)

时间:2019-03-01 20:45:45 来源:凤凰彩票官网 作者:匿名



五,荧光显微镜

需要在荧光显微镜下观察用荧光抗体染色的标本。最好在染色当天进行显微镜检查,以防止荧光下沉并影响结果。荧光显微镜应在通风良好的暗室中进行。第一种选择是选择一个好的来源或过滤器。正确选择滤光片是良好荧光观察的重要条件。在源前面的一组激发滤光器,提供适当的激发光。激发滤光片有两种:MG是紫外线滤光片,只允许波长为275-400nm的紫外光通过,最大透过率为365nm; BG是蓝色紫外滤光片,仅允许蓝色在325-500nm波长之外。光通过,最大透射率为410nm。靠近目镜的一组阻挡滤光器(也称为吸收滤光器或抑制滤光器)用于滤除激发光,仅允许荧光通过。传输范围为410-650 nm,代码为OG(橙色)。和GG(浅绿黄色)两个。可以使用具有吸收滤波器OG4或GG9的激发滤波器BG12来观察FITC标记。当观察RB200标记时,BGl2可以与OG5组合使用。

6.在食品检验中的应用

免疫荧光检测技术已广泛应用于医药卫生领域,可检测细菌,病毒,寄生虫等,并在食品卫生领域得到越来越多的应用。以下是沙门氏菌荧光抗体检测的一个例子,表明免疫荧光抗体技术在食品检验中的应用。

(1)测试设备和试剂

除了富含沙门氏菌所需的物品外,还需要以下材料。

(1)滑动:76mm×26ram,厚度0.8~1.0mm,预先雕刻4×2个小方块,并编号。用洗涤剂彻底清洗油,滴定确认无油,然后浸入95%乙醇中使用。

(2)盖玻片:22mm×22mm,厚度0.13~0.17mm,洗涤同上,浸入95%酒精中使用。

(3)荧光显微镜。

(4)溶液和试剂:磷酸盐缓冲盐水:0.01m(pH9.0)PBS-0.85%NaCl;固定剂:依次加入60mL无水乙醇和30mL氯仿,再加入36%~38%10mL甲醛,4°C混合保存,重复使用不超过3次; pH9.0碳酸盐缓冲甘油:无水Na2CO3(相对分子质量105.99)6g,无水NaHCO3(84.01)37g溶于蒸馏水中,加入100mL,充分混合,然后加入pH9.0碳酸盐缓冲液,混合一份,加入9份甘油,4°C,不超过2周为宜;沙门氏菌多价荧光抗体试剂:使用国家进出口FITC标记的沙门氏菌A-67全价“OH”免疫球蛋白(或沙门氏菌A-60多价“OH”免疫球蛋白),由商品检验局批准,用通常的染色浓度染色由试剂表示,稀释后使用稀释法。稀释的荧光抗体试剂可以在4℃下储存约1个月,保持其固有的染色亮度不变。(2)操作步骤

荧光抗体技术是使用用荧光素标记的已知抗体检测相应抗原的特异且灵敏的方法。它可以直接用于细菌混合培养物的测试,因此优于传统的血清学方法。

该方法对样品制备,富集培养方法,涂片,染色显微镜和溶液试剂的制备,标记抗体的储存和实验中染色效力的测定具有严格的规定,以使非特异性染色最小化。避免犯错误。操作方法如下。

(1)样品制备对于规定的直接富集培养的肉样,可以使用粉碎方法或棉签施用方法代替均质器破碎方法,以防止细颗粒过度干扰显微镜检查效果。

(2)将富集培养物样品富集在sF或MM培养基中并培养约18小时。

(3)涂抹,固定,染色

1取2毫米直径接种物接种的最终培养环1,制成薄的标本涂片,在37℃培养箱或室温下干燥,然后用乙醇 - 氯仿 - 甲醛固定剂固定。 5至10分钟,然后用95%乙醇空气干燥(该乙醇优选不再使用三次)。

2将沙门氏菌A-67全价“OH”免疫球蛋白试剂(染色工作浓度)加入每个标本涂片中,置于37℃,30分钟的潮湿箱中,取出0.01 lmol/L,PH 9.0 PBS除去过量的荧光抗体,将相同的PBS浸渍10分钟,用蒸馏水冲洗,并风干。

加入3滴pH 9.0碳酸盐缓冲甘油后,盖上载玻片。

(4)低倍放大后首先用高倍显微镜观察显微镜检查,记录密封亮度和细菌量。

1细菌荧光染色亮度评价标准

:黄绿色闪亮荧光,细胞周围清晰,中心清晰

:黄绿色荧光,细胞和中心周围轮廓清晰

:黄绿色荧光较弱,周围和中心轮廓清晰

:只有暗淡的荧光,真菌的形状仍然可见

一:没有荧光,或不清楚

2结果判断

阳性:细胞的荧光达到?,细胞的形态与沙门氏菌一致。在大多数领域中,可以检测到几个细胞。

怀疑是积极的:a。细菌的形状是一致的,荧光亮度在上面,但单位视野中的细菌数量太少或只有少数视野看到一些细菌积累;湾荧光强度高于,但细胞荧光不完全或形态不典型; C。细菌形状一致,荧光强度为?,但细菌数量多,分布相对均匀。负:荧光亮度低于,并且不在可疑正范围内,均为负值。

(3)报告

(1)阴性显微镜检查报告为“未检测到的沙门氏菌”,或“未检测到亚利桑那细菌”或“未检测到沙门氏菌和亚利桑那细菌”。

(2)阳性显微镜检查根据ZB-8-83《出口食品沙门氏菌(包括亚利桑那菌)检验方法》,继续培养检查,并报告结果。如果培养方法与荧光法不一致,则应使用原始富集液再次进行纯分离培养试验,并根据结果进行报告。

(3)显微镜检查的疑似阳性用原始富集液重新涂抹,染色和显微镜检查。如果仍未确定,则原始富集液也用于根据原始方法继续培养检查,并根据培养方法报告结果。

参考:现代食品检测技术

相关链接:

免疫荧光技术在食品检测中的应用(1)

[关键词]免疫荧光分析,食品检测,荧光抗体,国家标准物质网络

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